目前，常用的****方法多采用物理方法(如幹熱**法、濕熱**法、過濾**法、射線**法等)和化學方法(**劑、***)兩大類。
1.幹熱**法
是利用恒溫幹燥箱內160℃～170℃的高熱，並保持90～120分鍾，殺死**和芽孢，達到**目的的一種方法。主要適用於不便在壓力蒸汽**器中進行**，且不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的**。用此方法**的物品幹燥，易於貯存。酒精燈火焰燒灼**法也是屬於幹熱**的方法之一，在進行微生物檢測工作時，常須利用工作台麵上的酒精燈火焰對金屬器具及玻璃器皿口緣進行補充**。
2.濕熱**法
壓力蒸汽濕熱**法是目前*常用的一種**方法。它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋白質凝固變性而使微生物死亡。適合於布類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和培養基的**。高壓蒸汽**器的蒸汽壓力一般調整為0.10-0.11MPa，維持20～30min即可達到**效果。
3.射線**法
利用紫外線燈進行照射**的方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線的作用機製是通過對微生物的核酸及蛋白質等的破壞作用而使其滅活。適合於實驗室空氣、地麵、操作台麵**。**時間為30min。用紫外線**時應注意，不能邊照射邊進行實驗操作，因為紫外線不僅對人體皮膚有傷害，而且對培養物及一些試劑等也會產生不佳影響。
4.過濾**法
是將液體或氣體通過有微孔的濾膜過濾，使大於濾膜孔徑的**等微生物顆粒阻留，從而達到**的方法。過濾**法大多用於遇熱易發生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養基等。
目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過濾**，或用玻璃**濾器、濾球負壓過濾**。濾膜孔徑應在0.22～0.45μm範圍內或用更小的**濾膜，溶液通過濾膜後，**和孢子等因大於濾膜孔徑而被阻，並利用濾膜的吸附作用，阻製小於濾膜孔徑的**透過。
5.化學**劑**法
用於那些不能利用物理方法進行**的物品、空氣、工作麵、操作者皮膚、某些實驗器皿等。常用的化學**劑包括甲醛、高錳酸鉀、70%～75%乙醇、過氧乙酸、來蘇爾水、0.1%新潔爾滅、環氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%～75%乙醇、0.1%～0.2%氯化汞、10%次氯酸鈉、飽和漂白粉等進行實驗材料的**；利用甲醛加高錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加熱熏蒸法進行無菌室和培養室的**。在使用時應注意安全，特別是用在皮膚或實驗材料上的**劑，須選用合適的藥劑種類、濃度和處理時間，才能達到安全和**的目的。
6.***抑菌法
主要用於培養基，是培養過程中預防微生物汙染的重要手段以及作為微生物汙染不嚴重時的“急救”措施。常用的***有青黴素、鏈黴素和新黴素等。
1.無菌操作室**
由於無菌操作室的汙染來源主要是空氣中的**和**孢子，因此長期停用後的無菌操作室應進行熏蒸**，熏蒸是用高錳酸鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進行無菌室的**。經常使用的無菌操作室，在每次使用前都應進行地麵衛生清潔，並用紫外線燈照射30min，進行空氣**。對超淨工作台，每次操作前用紫外燈照射30min，然後用70%～75%酒精擦拭。
2.培養液**
培養液在製備過程中帶有各種雜菌，分裝後應立即**，至少也應在4小時內完成**工序。目前常用過濾**法除去培養物操作液和培養液中的**。或對培養液中耐熱組分先進行高壓蒸汽**，然後在無菌室加入經過過濾**的不耐熱溶液，混勻後分裝備用。
使用高壓蒸汽**器**時，將分裝好的培養液放入底部有一定量(淹沒加熱管)涼水的高壓蒸汽**器內，增壓至0.035~0.040 MPa時排淨**器內冷空氣，以便使蒸汽能到達各個**部位，保證****徹底。然後繼續加壓加熱，當壓力表讀數達到0.10~0.11MPa為121℃，保持15~20min即可。由於****效果取決於溫度而不是壓力，所以在一定壓力下保持較長的****時間是必須的。
在121℃的蒸汽溫度下可以很快殺死各種**及高度耐熱的芽孢杆菌，因此許多培養液的****壓力、溫度一般保持在0.10~0.11MPa、121℃。****時間與需要****的培養液量密切相關(表1)，時間不足達不到**效果，時間過長培養液內的一些化學物質遭到破壞，影響培養液成分。****結束後，關閉熱源，隻有當**器內壓力降為零時才能打開放氣閥，排除剩餘蒸汽，取出培養液。不可在壓力較高時打開放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。培養液組成中如含有遇熱易分解的物質，則需用過濾方法****。首先對培養液中耐熱組分進行高壓蒸汽**後放置在無菌場所，固體培養液在40℃左右瓊脂即將凝結前，加入經過過濾**的不耐熱溶液，混勻後冷卻備用。
3.玻璃器皿、塑料器皿和器械**
玻璃器皿可進行幹熱**或高壓蒸汽**，但在蒸汽**後*好及時烘幹水分。對不能進行高壓蒸汽**的塑料器皿可用75%酒精浸泡，使用前在無菌操作台麵上晾幹的同時，用紫外線重複**。實驗室還可以用環氧乙烷**袋對塑料器皿進行**，**後的器皿要充分散氣2～4小時後才可使用。無菌操作所用的各種器械，一般采用幹熱或高壓蒸汽**，或用75%酒精浸泡，然後在無菌操作台麵上晾幹的同時再用紫外線重複**；在使用期間可多次對其進行酒精燈火焰灼燒**。
4.培養材料的****
采自動物機體的實驗材料，攜帶著微生物及雜質，接種前須進行表麵****，對內部已受微生物侵染的材料應予以淘汰。從動物機體采集的某些組織塊，須用**劑進行浸泡處理，進行表麵**。常用**劑有過氧化氫(10~12%，浸泡5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
撰寫驗證方案及製定評估標準。
確認**設備技術資料齊全、安裝正確，並能處於正常運行。
確認關鍵設備控製儀表在規定的參數範圍內能正常運行。
采用被**物品或模擬物品進行重複實驗確認**效果符合規定。
完善文件記錄，撰寫驗證報告。
關鍵參數應在驗證確定的範圍內：溫度、壓力、時間、濕度、**氣體濃度、輻照劑量等。
**程序定期驗證，時效不超過半年。
**設備或程序發生變更重新進行驗證。
**效果與**前產品汙染程度及汙染菌特性有關，把握微生物汙染水平及汙染菌耐受性，注意各個環節降低汙染程度。
**冷卻階段防止已**物品再次汙染。
適用生物指示劑、化學指示劑等監控**結果。
基本要求：
菌種的耐受性應大於需**產品中所有可能汙染菌的耐受性。
菌種應無致病性。
菌株應穩定，存活期長，易於保存。
易於培養。若使用休眠孢子，孢子含量在90%以上。
濕熱**：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為5×105～5×106個/片)。
幹熱**：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105～5×106個/片)。
輻射**：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子數為5×107～5×108個/片)。
高壓蒸汽**法：用高溫加高壓**，不僅可殺死一般的**，對**芽胞也有殺滅效果，是*可靠、應用*普遍的物理**法。主要用於能耐高溫的物品，如金屬器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡膠及一些**和部分培養基的**。